Tesis Doctorales

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http://repositorio.udd.cl/handle/11447/2195

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Browsing Tesis Doctorales by Author "Ezquer, Marcelo"

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    Evaluation of the promotion of pro-metastatic capacities mediated by sEVs secreted by MDA-MB-231 metastatic breast cancer cells and identification of “EMT-promoter” sEV-miRs present in their cargo
    (Universidad del Desarrollo. Facultad de Medicina, 2023) Durán Jara, Eduardo Felipe; Lobos-González, Lorena; Ezquer, Marcelo
    Breast cancer (BC) is one of the most common and deathly cancers worldwide. However, despite the improvements in screening and treatment, there is a high probability of local recurrence and distant metastasis to occur; the latter being the main cause of the patient’s death. Communication between heterogeneous tumor cells mediated by small extracellular vesicles (sEVs) is essential to promote tumorigenesis and metastasis. sEVs are nanosized vesicles secreted by all cell types that mediate intercellular communication through their cargo, which include nucleic acids, proteins and other biomolecules. However, the mechanisms and specific molecules involved in these phenomena are still not completely defined and vary between different cancer types. Among the molecules described in the cargo of sEVs are microRNAs (sEV-miRs); small non-coding, single-stranded RNA molecules of approximately 20 nucleotides, which are master regulators of gene expression. It is widely demonstrated that cellular miRNA dysregulation can promote tumor growth, progression and metastasis. These findings have positioned miRNAs, and particularly sEV-miRs as a new research focus worldwide. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a complex and dynamic process that involves many cellular and molecular changes. Cells undergoing EMT can increase their tumorigenic and pro-metastatic capacities, such as cell migration and invasion, cytoskeleton remodeling, increased anchorageindependent growth, among others. Some miRNAs have been implicated in the regulation of EMT in BC, such as members of the let-7 and miR-200 family, as well as miR-105, miR-21 and miR-10b. However, to date there are very few studies that consider BC tumor cells-secreted sEVs as vehicles for “EMTpromoter” sEV-miRs, favoring the EMT and EMT-related phenotypic and functional changes (such as increased migration), promoting the tumorigenic and/or metastatic potential of recipient cells. Therefore, we hypothesize that the EMT and the migration of cells with no metastatic potential is favored by specific sEV-miRs in the cargo of metastatic BC cell-secreted sEVs. The aim of this project is to characterize the sEV-miRs profile of metastatic BC cells and identify specific sEV-miRs that could induce EMT and/or migration in cells with no metastatic potential. The findings of this thesis could be relevant in order to identify new possible BC biomarkers in sEVs, as well as the possible use of specific sEV-miRs as therapeutic options to treat this disease.
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    Formulación tópica a base de compuestos bioactivos naturales y nanopartículas de cobre estabilizadas en miel, para el tratamiento de heridas crónicas.
    (Universidad del Desarrollo. Facultad de Medicina, 2024) Jaldin Crespo, Limberg; Martínez Arenas, Jessica; Ezquer, Marcelo
    Las complicaciones en el tratamiento de heridas crónicas representan un desafío significativo para la medicina moderna. En este sentido, la necesidad de enfoques terapéuticos integrales y potentes en el cuidado de heridas es cada vez más crítica, dado que una herida infectada, con una colonización bacteriana mayor a 105 UFC/ml, puede desencadenar inflamación crónica y estrés oxidativo, resultando en tiempos de curación prolongados o incluso en complicaciones severas como amputaciones y shock séptico. Al respecto, la presente tesis se enfocó en evaluar el potencial de combinar de manera sistemática y racional productos naturales, como el extracto de propóleo (EP) y el extracto de hoja de olivo (EHO), con nanopartículas de cobre estabilizadas en miel (H-CuNP) como una posible alternativa terapéutica. En primer lugar, partimos con la síntesis de dos lotes de H-CuNP mediante un método verde de reducción asistida por ultrasonido, estableciendo un protocolo reproducible y obteniendo partículas con características controladas. Las nanopartículas fueron caracterizadas utilizando técnicas como espectroscopia UV, TEM/SEM, NTA, DLS y DRX, confirmando la presencia de H-CuNP metálicas con propiedades fisicoquímicas similares a las descritas en la literatura. Simultáneamente, se estableció un proceso de estandarización para asegurar la calidad del EP y EHO, se evaluó el contenido fenólico y la capacidad antioxidante del EP y el EHO, demostrando que el EHO posee un mayor contenido de polifenoles totales y mayor capacidad antioxidante en comparación con el EP. En segundo lugar, se evaluó la actividad antimicrobiana (IC50) de los extractos naturales (EP y EHO) y las H-CuNP, frente a bacterias prevalentes en heridas crónicas, como S. aureus (Gram+) y P. aeruginosa (Gram-). Aquí se evidenció una mayor efectividad de las H-CuNP (IC50:67 μg/ml) y EP (IC50:33 μg/ml) frente a P. aeruginosa y S. aureus respectivamente. Los estudios de viabilidad celular in vitro revelaron que las H-CuNP exhiben un IC50 más bajo (60 μg/ml), indicando mayor toxicidad celular comparada con el EP (IC50: 125 μg/ml) y el EHO (IC50: 250 μg/ml). La evaluación del cierre de herida in vitro demostró que las H-CuNP (50 μg/ml), EP (125 μg/ml) y EHO (250 μg/ml) inhiben la migración de fibroblastos dérmicos humanos (HDF). Para la optimización de combinaciones, se utilizaron dos metodologías: el enfoque del Mayor Agente Único y el Diseño de Compuesto Central rotatorio (DCC). Lo cual permitió identificar combinaciones de H-CuNP, EP y EHO, con una capacidad superior para: inhibir radicales DPP, inhibir bacterias tanto ATCC como multi-drogo-resistentes y manteniendo una viabilidad celular similar a la de sus componentes individuales. Estos hallazgos sugieren que la combinación de H-CuNP con extractos de propóleo y hoja de olivo puede ser una opción efectiva y multifuncional para el tratamiento de heridas crónicas, donde es crucial reducir la colonización bacteriana y regular el estrés oxidativo. Esta estrategia innovadora presenta un potencial tratamiento para heridas infectadas, contribuyendo a la lucha contra la resistencia antimicrobiana y previniendo la cronicidad de las heridas.

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